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葡聚糖凝膠使用說明

2012/2/20 15:43:50  作者:labgogo


1 化學(xué)和物理性質(zhì)

葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度,因此它們的溶脹度和分級(jí)分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細(xì)級(jí)的葡聚糖凝膠是用于需要極高分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級(jí)和中級(jí)的凝膠用于制備性色譜過程,可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外,粗級(jí)也可用于批量工藝。

1.1 化學(xué)穩(wěn)定性

葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學(xué)降解)。它在水、鹽溶液、有機(jī)溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的,在強(qiáng)酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應(yīng)避免使用。

1.2 物理穩(wěn)定性

葡聚糖凝膠并不熔融,可以在濕態(tài)、中性PH進(jìn)行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機(jī)械強(qiáng)度取決于交聯(lián)度。

2 產(chǎn)品說明

產(chǎn)

應(yīng)  

葡聚糖凝膠 G-10

<700

緩沖液交換、脫鹽,分離小分子,去除小分子

葡聚糖凝膠 G-15

<1500

緩沖液交換、脫鹽,分離小分子,去除小分子

葡聚糖凝膠 G-25

1000-5000

工業(yè)上脫鹽及交換緩沖液

葡聚糖凝膠 G-50

1000-30000

多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定

葡聚糖凝膠 G-75

2000-70000

蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定

葡聚糖凝膠 G-100

2000-120000

蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定

葡聚糖凝膠 G-150

5000-300000

蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定

葡聚糖凝膠 G-200

5000-600000

蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定

3 使用方法

3.1 乙醇浸泡

    在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí),并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干。

3.2 無鹽水浸泡

    室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時(shí),間隙攪拌,以保證凝膠的完全溶脹。

3.3 鹽酸浸泡

    在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時(shí),間隙攪拌,濾干,水洗只中性。

3.4 裝柱

將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層。

3.5 平衡

上樣前平衡層析柱至少3-5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的BufferPH值)。

3.6 上樣

凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關(guān),柱高控制在40-50cm 以下,過高的凝膠層會(huì)引起較大的反壓,應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時(shí)高徑比為51即可。

3.7 洗脫方法

     可以用無鹽水,也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以完全分離純化。

3.8 在位清洗(CIP

     凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h1M氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積,再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。

 

 

(備注: 其它規(guī)格葡聚糖凝膠處理方法類似。)

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