卡拉洛爾的危害及檢測(cè)目的
卡拉洛爾又名咔唑心安，化學(xué)名4- (3-異丙胺基-2-羥丙氧基) 咔唑，屬β腎上腺受體阻斷劑，在獸醫(yī)臨床中常用于消除動(dòng)物緊張，特別是在運(yùn)輸過程中防止因應(yīng)激導(dǎo)致的動(dòng)物死亡。β腎上腺受體阻斷劑目前已成為臨床上常見的七類獸藥殘留之一，其代表性藥物卡拉洛爾常在動(dòng)物屠宰前數(shù)小時(shí)內(nèi)注射使用，因此相對(duì)其他獸藥可能對(duì)消費(fèi)者造成的健康風(fēng)險(xiǎn)更高。因此我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》中明確規(guī)定了卡拉洛爾在豬靶組織中的殘留限量。
本文闡述了如何將卡拉洛爾從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)化成液質(zhì)聯(lián)用儀可以檢測(cè)的形式。以提取、凈化為重點(diǎn)，依據(jù)行標(biāo)SN/T 4144-2015，為檢測(cè)人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。
檢測(cè)項(xiàng)目：卡拉洛爾
應(yīng)用范圍：豬肉、魚肉、蝦肉、肝臟、腎臟、脂肪、奶、雞蛋和蜂蜜
高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法
方法原理：試樣中的卡拉洛爾用甲醇（脂肪用乙酸乙酯-正己烷溶解提取）提取，提取液經(jīng)MCX柱凈化（脂肪用GPC凈化）后，供液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測(cè)定，外標(biāo)法峰面積定量。
前處理儀器：
凝膠凈化色譜儀；電子天平（感量0.01 g 和0.1 mg）；組織搗碎機(jī)；渦旋混勻器；氮吹儀；均質(zhì)機(jī)（10000 r/min）；離心機(jī)（6000 r/min）；具塞塑料離心管（50 mL）。
檢測(cè)儀器：LC-MS/MS+ESI源
樣品的制備與保存
1.肌肉（豬肉）、內(nèi)臟（肝臟、腎臟）、脂肪和水產(chǎn)品（魚肉、蝦肉）：取代表性樣品約500 g，用組織搗碎機(jī)搗碎，裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標(biāo)識(shí)，于零下18 ℃下保存。
2.奶、蜂蜜、雞蛋：取代表性樣品約500 g，攪拌均勻后裝入潔凈容器內(nèi)密封并做好標(biāo)識(shí)，于4 ℃下保存。
前處理方法
1.提取
肌肉（豬肉）、內(nèi)臟（肝臟、腎臟）、魚肉、蝦肉
稱取5 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入15 mL甲醇，渦旋提取2 min，用均質(zhì)器（10000 r/min）均質(zhì)2 min，5500 r/min離心3 min，將有機(jī)相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，殘?jiān)儆?5 mL甲醇均質(zhì)提取一次。離心合并有機(jī)相，用水定容至50 mL，待凈化。
奶、蜂蜜、雞蛋
稱取5 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入15 mL甲醇，渦旋提取2 min，5500 r/min離心3 min，將有機(jī)相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，殘?jiān)儆?5 mL甲醇渦旋提取一次。離心合并有機(jī)相，用水定容至50 mL，待凈化。
脂肪
稱取2 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入20 mL乙酸乙酯-環(huán)己烷（1+1）溶解并混勻，5500 r/min離心3 min，將有機(jī)相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，殘?jiān)儆?0 mL乙酸乙酯-環(huán)己烷（1+1）溶解提取一次。離心合并有機(jī)相，用乙酸乙酯-環(huán)己烷（1+1）定容至50 mL，待凈化。
2.凈化
肌肉（豬肉）、內(nèi)臟（肝臟、腎臟）、魚肉、蝦肉、奶、蜂蜜、雞蛋
MCX柱（60 mg/3 mL）依次用甲醇3 mL和水3 mL活化，加入5.0 mL待凈化液，用3 mL水淋洗，用抽空3 min。用5 mL 5 %三乙胺-甲醇洗脫，收集洗脫液，于40 ℃氮?dú)鉂饪s吹干，殘?jiān)?0 %乙腈水溶液1.0 mL溶解后，加2 mL乙腈飽和正己烷脫脂，下層清液過0.45 μm濾膜，供液質(zhì)測(cè)定。
脂肪
凝膠滲透色譜條件
凝膠色譜凈化系統(tǒng)：Accuprep（J2）；
凝膠凈化柱：Bio-Beads S-X3（38 μm～75 μm），400 mm×25 mm（內(nèi)徑）；
流動(dòng)相：乙酸乙酯-環(huán)己烷（1+1）；
流速：5 mL/min；
收集時(shí)間：7 min~17 min。
凈化過程：
取10 mL待凈化液于GPC樣品管中，用GPC柱凈化，收集洗脫液，于40 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，殘?jiān)?0 %乙腈水溶液1.0 mL溶解后，加2 mL乙腈飽和正己烷脫脂，下層清液過0.45 μm濾膜，供液質(zhì)測(cè)定。
國標(biāo)解讀及注意事項(xiàng)
1.卡拉洛爾標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用乙腈配成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在0 ℃～4 ℃ 避光保存。
2.本方法使用甲醇提取兩次目標(biāo)化合物，陽離子交換柱富集凈化，相當(dāng)于0.5 g試料進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)（其中脂肪樣品用乙酸乙酯-正己烷提取兩次，再用GPC柱凈化，相當(dāng)于0.4 g試料進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)）。
3.MCX固相萃取過程中需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下，以保證離子交換的效果。
洗脫過程中洗脫溶劑少量多次加入，可以增加洗脫率。
4.在GPC凈化過程中配合紫外檢測(cè)器使用，可以準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)目標(biāo)化合物及雜質(zhì)的流出情況。